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    細胞培養的操作過程

    發布時間: 2022-05-23  點擊次數: 183次
       細胞培養技術也叫細胞克隆技術,在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術,還是其中之一的生物克隆技術來說,細胞培養都是一個不可少的過程,細胞培養本身就是細胞的大規??寺?。細胞培養,既包括微生物細胞的培養,也包擴細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,這是克隆技術不可少的環節,而且細胞培養本身就是細胞的克隆。通過細胞培養得到大量的細胞或其代謝產物。因為生物產品都是從細胞得來,所以可以說細胞培養技術是生物技術中最核心、最基礎的技術。
      細胞培養操作過程:
      注意無菌。無論哪一管液體,開蓋后盡量立即關上(如果有幾瓶都需要開的,也注意,可以虛蓋)。蓋子向上放。操作時不要從開蓋的容器上方經過。另外,無菌臺面上擺放的各種東西,最好是一字擺開,平行于自己。盡量不要前后重疊。
      細胞操作中所用的所有耗材試劑最好都是細胞培養專用。一般都以一次性耗材居多。1ML槍頭為加長型專用培養槍頭。移液管亦有專用10mL一次性無菌移液管
     ?。?)細胞換液:
      培養皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養液,加入新培養液。
     ?。?)細胞傳代:
      傳代之前先觀察,細胞是否密集,是否開始融合。一般融合達到70-80%就可以傳代。早點傳代也可以。
      如果是貼壁生長的細胞:
      1) 培養皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養液;
      2) 無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次(按培養體積加入);
      3) 加入適量胰酶消化適當時間(一般胰酶為0.25%;9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶,一次加入1mL胰酶。消化時間視細胞類型等多種情況綜合考慮,一般如果是細胞株,非原代培養,消化1-2分鐘足矣);
      4) 用槍頭吹打數十次(視細胞類型而定。一般細胞株30-50次吧,耗時一般2分鐘左右);
      5) 加入適量體積*培養基終止胰酶消化(如果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶,可以加入1mL*培養基;現在培養瓶(皿)里有2mL溶液)。
      6) 現在可以將溶液進行分瓶(2mL)。如果是細胞株,直接均分到兩個培養瓶(皿)里。如果是原代培養,可以根據消化時間來對細胞進行分離;因此可以將溶液(2mL)都轉入新的培養瓶(皿)。
      7) 將兩個培養瓶(皿)補足*培養基到正常體積(果是9cm/10cm培養皿和25cm培養瓶,為5mL*培養液)
      8) 鏡下觀察。剛剛傳代細胞還沒貼壁,懸浮在溶液中,呈圓形。一般2h之內會貼壁,如果已經貼壁,根據細胞類型有不同的形態,但通常都不是圓形。
      9) 鏡下觀察無誤之后,再放入細胞培養箱。培養瓶(皿)放入之前,可以用消毒酒精先擦一下。
      10) 傳代之后,最好第二天細胞換液一次。當然,也可以視情況而定。
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